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嘔吐毒素親和柱的檢測(cè)過程解析

更新時(shí)間:2019-10-27      點(diǎn)擊次數(shù):1374
嘔吐毒素親和柱檢測(cè)原理:測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。DON單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上,樣品中的DON經(jīng)過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢的通過DON嘔吐毒素親和柱。在嘔吐毒素親和柱內(nèi),毒素與抗體結(jié)合,之后洗滌嘔吐毒素親和柱除去沒有被結(jié)合的雜質(zhì),用甲醇洗脫DON。
 
嘔吐毒素親和柱的檢測(cè)過程解析:
一:樣品前處理
稱取10g 面粉加入100ml 水,高速均質(zhì)1 分鐘,用玻璃纖維濾紙過濾至澄清,取2ml 濾液作為待上樣液。
 
二:檢測(cè)前的準(zhǔn)備和注意事項(xiàng)
1. 將所需的免疫親和柱在使用前回溫至室溫(20-25℃)。
2. 免疫親和柱的上下端有塑料塞子,在使用時(shí)可以取下。
3. 在使用的過程中避免免疫親和柱的干燥。例外情況為洗脫前短暫的排空和洗脫后的*排空
4. 過高的壓力或真空提取設(shè)備產(chǎn)生的負(fù)壓會(huì)壓緊凝膠而導(dǎo)致回收率降低。
 
三:嘔吐毒素親和柱操作過程
• 將5ml 或10ml 注射器連接于免疫親和柱上端(通過小柱連接件)。
• 2ml 處理好的樣品液以1-2 滴/ 秒的速度通過親合柱,棄掉流出的液體。
• 以5ml 水淋洗柱子一次,棄掉流出的液體。
• 利用真空設(shè)備壓入空氣(約10 秒),確保排除所有的液體。
• 用1ml 甲醇緩慢洗脫(流速約為2-3 秒每滴),殘留的洗脫液使用空氣壓出或真空抽出(30 秒)并將洗脫液收集于干凈的收集管中。
• 將洗脫液吹干后加入1ml 流動(dòng)相復(fù)溶,用于液相色譜檢測(cè)。
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